MICM整合诊断技术解析（三）：免疫学分析_MICM整合诊断技术之免疫学分析的应用与价值

本文是高博医学（血液病）北京研究中心北京高博博仁医院童春容主任连载介绍MICM整合诊断技术的第三期，继上期讲述了细胞形态学、细胞化学染色和组织病理学的作用后，本期将重点解读免疫学分析的原理和意义。
一、概述
免疫学分析包括免疫组织化学染色（IHC）和流式细胞术（FCM），它们的共同点是利用不同的染料或荧光染料标记的单克隆抗体（单抗，mAb）对细胞悬液、细胞涂片或骨髓组织切片进行染色，然后在相应的仪器下观察细胞表面或细胞内的抗原标记。
免疫学分析技术是识别血液肿瘤细胞系列的关键技术，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、髓系细胞、自然杀伤（NK）细胞、自然杀伤性T（NKT）细胞、淋巴样浆细胞、浆细胞、树突细胞（DC）和非血液淋巴系统细胞等。特别是对于双表型、双克隆性、甚至多系列的血液肿瘤，只有通过免疫学分析才能确诊。
该技术也是判断血液肿瘤细胞分化受阻阶段的关键技术，如早期或前体或原始，晚期或成熟或外周。以急性白血病为例，如果结合形态学、细胞化学染色和FCM，诊断与分型的准确率及一致率可达90%以上，且重复性高。
急性白血病是一种病情进展迅速的血液病，有时在一天之内就可能出现危急情况，因此需要快速诊断并治疗。通过形态、细胞化学染色和FCM对急性白血病的诊断和分类，最快几个小时就可明确疾病诊断，医生可根据这些结果为患者制定治疗方案，避免错过急性白血病的治疗时机。
IHC是用染料或荧光染料标记的抗体对组织病理切片的组织细胞染色，抗体与抗原结合后，染料或荧光素发出可见光或荧光，可在光镜或荧光显微镜下观察细胞表达的免疫标志。IHC是目前病理检查最常用的方法，一般与组织病理普通染色同时进行。
1、IHC的优点
病理组织标本IHC具有组织病理的优点，可以在保持组织结构的情况下进行IHC，比FCM更容易确定某一免疫标志阳性或阴性细胞在组织部位的定位；对于一些难以抽取的细胞、罕见细胞、体积很大的细胞等也可进行分析；一些免疫标志用IHC检测比FCM更准确，如细胞周期蛋白D1（cyclin D1，CCND1）等。
2、IHC的局限性
IHC一般每次染色只能用一种抗体，但是很少有一种免疫标志是恶性细胞特异性的标志。
在免疫标记染色后，细胞形态特点不清楚，很难在不同染色切片对同一类细胞定位并确定这类细胞表达的全部标志，尤其是对那些不改变组织结构的血液肿瘤细胞、或血液肿瘤细胞没有定位于特定的组织结构区域，与反应性良性细胞混合分布的病理标本。
此外，在血液肿瘤细胞比例明显比正常细胞少的情况下，仅根据IHC难以鉴定细胞的良恶性、恶性细胞的细胞系列及分化阶段；目前有些抗体很难成功用于IHC染色和分析，如T细胞抗原受体（TCR）αβ或γδ链、免疫球蛋白轻链、TCRvβ区，因此采用IHC很难诊断γδT淋巴瘤，也很难进行成熟B细胞、T细胞的克隆性分析。
同样，IHC的诊断医生需要具有组织病理医生那样丰富的知识和经验，还要了解IHC染色试剂的优缺点。
FCM是将标本制备成单个细胞悬液，然后将这些用荧光染料标记的单抗标记细胞通过流式细胞仪进行检测的方法。流式细胞仪可以探测单个细胞的大小、细胞内颗粒的多少，及标记在细胞上的荧光光谱，并将光信号转化为电信号，用计算机存贮下来，再用分析软件进行分析。
1、FCM的优点
流式细胞仪除了直接探测细胞的大小、细